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福州木辰生物科技有限公司
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產(chǎn)品線涵蓋分子生物、細(xì)胞培養(yǎng)、樣品處理、微生物學(xué)、樣品凍存、免疫檢測、核酸提取、蛋白純化、食品檢測等方面,為客戶提供品質(zhì)產(chǎn)品及專業(yè)技術(shù)服務(wù)。

細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和使用方法
來源: | 作者:muchen | 發(fā)布時間: 2021-08-05 | 734 次瀏覽 | 分享到:
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細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具,形狀、規(guī)格、用途多樣。

細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇
1)細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);
2)培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;
3)根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗?zāi)康亩ā?/span>

平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇
1)貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。
2)懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。
3)U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。
4)V型培養(yǎng)板有時用做免疫學(xué)血凝集的實驗。

不同型狀的板子自然有不同用途
平底的什么類型的細(xì)胞都可用,但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少,如做克隆時,就用96孔平底板。另外﹐做MTT等實驗時,無論貼壁和懸浮細(xì)胞,一般均用平底板。

至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時﹐需要二者相互接觸以刺激。因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi),V型板的用途更少﹐一般用于細(xì)胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細(xì)胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種實驗也可用U型板替代(加入細(xì)胞后﹐低速離心)。

如果是養(yǎng)細(xì)胞的話, 通常是運(yùn)用平底的, 另外要特別注意材質(zhì), 標(biāo)示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養(yǎng)細(xì)胞用的。

圓底的通常是拿來做分析, 化學(xué)反應(yīng), 或是保存樣品用。因為圓底比較好將液體吸得干凈, 如果用平底的就不好吸了。 不過, 如果你是要測吸光值的話, 一定要買平底的才行。

大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板,便于鏡下觀測、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對一致,還便于MTT檢測。

圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶嶒?,需要用?xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng),如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)”等。

問題集錦

問:我看到培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ,但不知道到底什么實驗用哪種規(guī)格,請指教。
答:要根據(jù)你具體的實驗要求,流式一般用6孔,MTT一般用96孔,細(xì)胞爬片一般用24孔等!要具體根據(jù)你實驗來定!

問:請問哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板,與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?謝謝??!
答:Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究,產(chǎn)品設(shè)計便于對晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。

有兩種sitting 和handing drop兩種方法,兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。

材料上選擇crystal class polymer ,特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu)。

細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細(xì)胞貼壁生長與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長材料,同時還有l(wèi)ow binding surface,有關(guān)更多實驗材料上的應(yīng)用與對材料的選擇。

問:我想測吸光度用酶標(biāo)儀,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請問酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?
答:用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉,我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

區(qū)別:酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),但也可以用來測蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測,它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。

如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子

【操作步驟】

1.加樣品:將標(biāo)本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(nèi)(預(yù)留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。

2.加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。

3.溫育:將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。

4.洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗:將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復(fù)5次后拍干。(2)機(jī)洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。

5.加酶標(biāo)工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標(biāo)工作液,置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。

6.顯色和終止反應(yīng):將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應(yīng)。


【結(jié)果判定】

1.酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm,先用空白調(diào)零,然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定,不必設(shè)置空白對照孔。

2.當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08,陽性對照(pc)OD值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗。

3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時,按0.05計算;當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。

4.標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性,標(biāo)本OD值>臨界值為陽性。

常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量:不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范圍,結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。


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